古典条件づけの学習過程

各画像スタックは、10 個の特徴点を使用して、Allen Common Coordinate Framework バージョン 3 (Allen CCF) の上面図に位置合わせした。特徴点は、(FrC)嗅球の両側前神経節、前頭血管の中央および側端、ラムダ縫合糸、背側皮質の両側後端、および背側皮質の両側側端に設定した。皮質に対するマスクはアレン CCF から作成され、大脳皮質の外側のピクセルの蛍光変化を除外した。左半球のピクセルのみの活動を利用した。ノイズ削減のために画像スタックの特異値分解 (SVD) を計算し上位24個の特異値から画像を再構成した。SVD の結果からは空間成分U(サイズのピクセル×成分)、特異値S(サイズの空間成分×時間成分)、および転置された時間成分VT（サイズコンポーネント×フレーム）が得られている。

再構成されたデータを使用すると、蛍光強度の変化 (Δ F / F) は、各フレームの前後の ± 15 秒間隔で 10 パーセンタイル値を使用して各ピクセルに対して計算した。ROIを使用した分析では、以下に説明する脳領域に12個のROI（10×10ピクセル、長方形）が設定され、定位座標はアレンCCFの上面図と以前に報告された領域に従って定義され、これらは解剖学的および機能的に識別: dmFrC (AP +2.8 mm、ML 0.8 mm)。dlFrC (AP +2.5 mm、ML 2.0 mm); M1 (AP +1.2 mm、ML 1.0 mm); 一次体性感覚前肢領域 (S1FL、AP +0.4 mm、ML 2.2 mm)。一次体性感覚皮質後肢 面積（S1HL、AP -0.5 mm、ML 1.5 mm）。一次体性感覚皮質口面積 (S1m、AP +1.4 mm、ML 3.0 mm)。一次体性感覚皮質鼻領域 (S1n、AP 0 mm、ML 3.4 mm); 一次体性感覚皮質バレル領域（S1b、AP -1.2 mm、ML 3.0 mm）。一次聴覚皮質（Aud、AP -2.5 mm、ML 4.0 mm）。一次視覚野（Vis、AP -4.0 mm、ML 2.2 mm）。後頭頂皮質（PPC、AP -2.0 mm、ML 2.0 mm）。後大脳皮質(RSC、AP -2.4 mm、ML 0.5 mm)。ここでの定位座標はROI の中心位置を意味している。

セッションとマウスごとに、ROI の位置を手動で微調整している。各ROIの蛍光強度は、含まれるピクセルを平均することによって決定した。ROI から抽出された神経活動は、Z スコアに変換され、各キュートーンの開始に合わせて調整した。各ピクセルごと，各時点−15〜＋15sの時間窓の10パーセンタイルをFとしてdF/F化している。

高速度カメラから得られたビデオは、FaceMap パッケージ ( Stringer et al., 2019 ) で処理され、口、鼻、ひげ、および上半身の部分を識別している。ROI は、前肢と胸部、鼻、口、ひげパッドに設定され、各 ROI の運動エネルギー (フレーム間の絶対差) の SVD が計算されました。ソフトウェアは、空間成分Uと特異値Sから計算された「モーション マスク」を生成した。SVDによって発見され、特異値空間での分離可能な動きの時系列は、モーションマスクに元の時系列データを掛けることによって計算している。